¿Cómo funciona AAV?
En pocas palabras, el AAV se transforma de un virus natural en un mecanismo de administración para la terapia génica. El ADN viral se reemplaza con ADN nuevo y se convierte en un vector codificado con precisión y ya no se considera un virus, ya que la mayoría de los componentes virales han sido reemplazados.
¿Cómo infecta el AAV las células?
El virus adenoasociado se propaga al coinfectar una célula con un virus auxiliar. Si no hay un virus auxiliar presente, AAV exhibe un comportamiento lisogénico. Cuando AAV infecta una célula sola, su expresión génica se reprime (AAV no se replica) y su genoma se incorpora al genoma huésped (en el cromosoma 19 humano).
¿Cuánto tiempo tarda en funcionar AAV?
Tiempo después de la infección. Debe pasar una cantidad de tiempo adecuada entre la inyección y el procesamiento del tejido para detectar la expresión génica mediada por AAV. El tiempo dependerá en gran medida del tipo de cápside y del tejido que esté infectando. Esperar ~2 semanas es un buen punto de partida para muchos tejidos.
¿Cómo se integra AAV en el genoma?
Los vectores AAV pueden integrarse por recombinación homóloga, lo que se denomina orientación génica mediada por AAV [27]. Para promover la recombinación homóloga se utiliza un vector que contiene brazos de homología derivados del ADN cromosómico genómico que flanquean la modificación genética que se está introduciendo.
¿Por qué se usan los Aav para la terapia génica?
El AAV, o virus adenoasociado, es actualmente el principal vector viral que los investigadores utilizan y desarrollan para la terapia génica porque se considera que no es patógeno para los humanos y porque se ha alterado con éxito para evitar su integración en el genoma, por lo que eliminando el daño del ADN e impredecible
¿AAV es un virus?
Existen beneficios importantes en el uso de AAV como el medio principal para administrar terapias genéticas: AAV es un virus que no se sabe que provoque enfermedades humanas. AAV no puede hacer más de sí mismo sin ayuda externa, por lo que no se replicará en el cuerpo como lo hacen los virus normales.
¿Para qué se usa AAV?
AAV inserta un gen terapéutico en el genoma de las células diana para proporcionar una expresión transgénica a largo plazo. Por ejemplo, el gen que expresa el factor de coagulación sanguínea FIX en un individuo de una cohorte persistió durante más de 10 años durante un ensayo clínico (141).
¿Cuál es la diferencia entre lentivirus y adenovirus?
Sin embargo, la diferencia en los vectores lentivirales es que poseen la capacidad de integrar su genoma en células que no se dividen. Sin embargo, estos vectores están limitados en su capacidad de carga genética y son propensos a la mutagénesis por inserción debido a la presencia de secuencias potenciadoras-promotoras robustas.
¿Qué son las cápsides de AAV?
El vector AAV tiene una cubierta de proteína protectora llamada cápside. La cápside es la interfaz principal entre el virus que contiene la copia funcional del gen de interés y las células diana.
¿Es AAV BSL 2?
Prácticas de laboratorio En general, el AAV se clasifica como un organismo de nivel de bioseguridad 1 (BSL-1), a menos que se use un virus auxiliar, entonces se clasificaría como un nivel de bioseguridad 2 (BSL-2).
¿Qué es el serotipo AAV?
Recientemente identificamos el receptor AAV (AAVR) (también conocido como KIAA0319L) como un receptor esencial para la transducción AAV de células humanas derivadas de una amplia gama de tejidos y en un modelo de ratón in vivo (21). Múltiples serotipos, incluidos AAV1, AAV2, AAV3B, AAV5, AAV6, AAV8 y AAV9, requieren AAVR para la transducción.
¿Cómo purifico el virus AAV?
El método estándar para la purificación de vectores adenovirales se basa en el uso de un gradiente de densidad de cloruro de cesio (CsCl) combinado con ultracentrifugación. Se realizan dos rondas de centrifugación en el virus y luego se extrae el virus purificado.
¿Por qué se utilizan los lentivirus?
Los vectores lentivirales en la terapia génica son un método mediante el cual se pueden insertar, modificar o eliminar genes en organismos que utilizan lentivirus. Los lentivirus son una familia de virus que son responsables de enfermedades notables como el SIDA, que infectan al insertar ADN en el genoma de sus células huésped.
¿Es el AAV un parvovirus?
El virus adenoasociado (AAV) es un parvovirus dependiente del ayudante que no se ha relacionado con enfermedades humanas. Este aspecto, en combinación con su amplio tropismo celular y tisular, y la respuesta viral limitada del huésped, lo ha convertido en un sistema de vector atractivo para la terapia génica.
¿Cómo se hace AAV?
Los AAV se produjeron mediante transfección conjunta de pHelper, vector de expresión de ITR de pAAV y genes Rep-Cap de pAAV en una proporción molar de 1:1:1 normalizada al tamaño del plásmido (consulte el suplemento).
¿Cómo se hacen los vectores AAV?
En ausencia de coinfección por el virus auxiliar, el genoma de AAV se integra en el genoma del huésped o se mantiene como episomas circulares de doble cadena (3–5). El vector de AAV recombinante se genera reemplazando los marcos de lectura abiertos de AAV de tipo salvaje con un casete de expresión génica objetivo (terapéutico o marcador).
¿Qué es la ingeniería de la cápside?
Su análisis identificó cambios en la cápside que mejoraron el potencial de “reubicación” de órganos específicos en ratones y la viabilidad del virus, así como una nueva proteína oculta en la secuencia de ADN que codifica la cápside.
¿Por qué se llama adenovirus?
Los adenovirus llevan el nombre de las adenoides humanas, de las que se aislaron por primera vez. Varios adenovirus pueden causar enfermedades respiratorias y conjuntivales.
¿Cuál es la principal diferencia entre bacterias y virus?
A nivel biológico, la principal diferencia es que las bacterias son células de vida libre que pueden vivir dentro o fuera de un cuerpo, mientras que los virus son una colección de moléculas no vivas que necesitan un huésped para sobrevivir.
¿Qué virus se utilizan en la terapia génica?
Varios tipos de virus, incluidos retrovirus, adenovirus, virus adenoasociados (AAV) y virus del herpes simple, se han modificado en el laboratorio para su uso en aplicaciones de terapia génica. Debido a que estos sistemas vectoriales tienen ventajas y limitaciones únicas, cada uno tiene aplicaciones para las que es más adecuado.
¿Cómo afecta la terapia génica a la vida humana?
La terapia génica reemplaza un gen defectuoso o agrega un gen nuevo en un intento de curar una enfermedad o mejorar la capacidad de su cuerpo para combatir la enfermedad. La terapia génica es prometedora para el tratamiento de una amplia gama de enfermedades, como el cáncer, la fibrosis quística, las enfermedades cardíacas, la diabetes, la hemofilia y el SIDA.
¿Es segura la terapia génica AAV?
Los vectores AAV se consideran seguros y normalmente no insertan sus propios genomas en el genoma humano. Sin embargo, varios estudios en ratones han demostrado que la integración genómica de vectores de terapia génica AAV puede causar cáncer de hígado. Denise Sabatino y sus colegas estudiaron la terapia génica AAV en nueve perros durante un máximo de diez años.
¿Por qué la terapia génica no tiene mucho éxito?
Las terapias génicas requieren bombear dosis masivas del virus portador a las personas, muchas veces más de lo que vería en una infección natural. En dosis tan altas, es mucho menos probable que un virus que normalmente no causa una respuesta inmune se salga de control y dañe al paciente.
¿Qué es la enfermedad de VAA?
AAV es un pequeño virus que infecta a los humanos mediante la integración de su vector en el genoma de la célula huésped. El virus provoca una respuesta inmunitaria muy leve y actualmente no se sabe que cause enfermedades, lo que respalda aún más su aparente falta de patogenicidad.