La solución permeable de saponina se prepara mezclando y disolviendo 0,5 g de saponina con 100 ml de PBS 5X (pH 7,4) seguido de filtración submicrónica y/o esterilización en autoclave a 15 PSI durante 60 minutos.
¿Cómo hacer una solución de Saponina al 10%?
Stock de saponina al 10 %: Mezcle 5 g de saponina (Sigma #S-7900) en 50 ml de CMF-PBS. Llevar a 37˚C hasta que la saponina se haya disuelto por completo. Utilice una jeringa de 50 ml con un cartucho de filtro desechable de 0,2 μm para filtrar la solución.
¿Cómo se hace una solución de saponina al 1%?
Para usar: 1) Haga una solución de trabajo 1x diluyendo la solución FACSLyse 10x con agua destilada. una. Por ejemplo, agregue 1 ml de caldo 10x a 9 ml de agua destilada.
¿Cómo disolver el polihema?
Por ejemplo, disuelva 2,4 gramos de polihema en 20 ml de etanol al 95 % (en un tubo falcon de 50 ml). Luego, séllelo con parafilm y colóquelo en una rueda a 55 grados centígrados durante la noche. Esta solución es 10X. Diluir 1:10 en etanol al 95% para obtener la solución final al 1,2%.
¿Cómo se hace el 5% de saponina?
Para crear una solución al 5 % p/v (10x), disuelva 5 gramos de saponina (Sigma 47036-50g-F) en 80 ml de agua. Mezcle completamente hasta que se disuelva agitando durante la noche a 4 grados C. q.v. 100 ml, esterilizar por filtración a través de un filtro de 0,2 um y almacenar a 4 °C.
¿Cómo se hace poliHEMA?
Para preparar la solución de poliHEMA, pese 1,5 g de poliHEMA y colóquelos en un frasco estéril. Añadir 95 ml de etanol absoluto de grado de biología molecular y 5 ml de agua destilada de grado de cultivo celular. El hidrogel poliHEMA se disolverá en el contenido de agua de la solución y el etanol esterilizará la preparación.
¿Cómo se hace una solución madre de higromicina?
Instrucciones de preparación La higromicina B es soluble en agua a >50 mg/mL. 2 También es soluble en metanol o etanol. Las soluciones deben esterilizarse por filtración, no en autoclave. La higromicina B se disuelve en agua a 50 mg/mL, luego se filtra en condiciones estériles para producir H 0654 o se irradia con rayos gamma para producir H 5527.
¿Cómo se hace la solución madre de puromicina?
Este producto es soluble en agua a 50 mg/mL. Se debe preparar una solución madre por filtración con un filtro de 0,22 μm y luego almacenarla en alícuotas a -20 °C. Este producto también es soluble en metanol a 10 mg/mL.
¿Cómo se prepara un tampón de permeabilización?
A. Solución salina tamponada con fosfato 1X (PBS): Para preparar 1 L de PBS 1X: agregue 100 ml de PBS 10X (#12528) a 900 ml de agua, mezcle. Tampón de permeabilización celular: compre listo para usar (#39487) o para preparar 10 ml, agregue 30 µl de Triton™ X-100 a 10 ml de tampón de dilución de anticuerpos. Conservar a 4°C.
¿Cómo se hace la solución madre de colagenasa?
Para medir la actividad enzimática, se prepara una solución madre de enzimas disolviendo 0,05 – 0,1 mg/ml de colagenasa en tampón TES 50 mM, pH 7,4 (37 ºC), que contiene cloruro de calcio 0,36 mM. Las concentraciones finales en la mezcla de reacción son TES 50 mM, cloruro de calcio 0,36 mM, colágeno 25 mg (Producto No.
¿Qué es el extracto de saponina?
Las saponinas son solubles en agua y grasa, lo que les da sus útiles propiedades jabonosas. Algunos ejemplos de estos químicos son la glicirricina, el saborizante de regaliz; y quillaia (alt. quillaja), un extracto de corteza utilizado en bebidas.
¿Qué le hace la saponina a las células?
La saponina, una molécula similar a un detergente, puede permeabilizar las membranas celulares sin destruirlas y, por lo tanto, puede usarse para la detección de antígenos intracelulares en células intactas con un citómetro de flujo.
¿Se pueden permeabilizar las células sin fijar?
Los antígenos cercanos a la membrana plasmática y los antígenos citoplasmáticos solubles requerirán una permeabilización celular leve sin fijación. Los antígenos citoesqueléticos, virales y algunos enzimáticos suelen dar resultados óptimos cuando se fijan con una alta concentración de acetona, alcohol o formaldehído.
¿Qué es el tampón de permeabilización?
Descripción del producto. El tampón de permeabilización es un tampón de permeabilización listo para usar para la tinción de inmunofluorescencia intracelular para microscopía o citometría de flujo. Solución detergente tamponada lista para usar. Permeabilice las células fijadas para aplicaciones de microscopía y citometría de flujo.
¿Cómo se permeabiliza una célula?
La permeabilización de las células a través de la fijación con metanol o acetona, o con el uso de un detergente, permite que los anticuerpos atraviesen la membrana celular y entren en la célula. El reactivo más común utilizado para la permeabilización celular es el detergente no iónico, Triton X-100.
¿En qué se diluye la puromicina?
Usando un stock de puromicina de 1 mg/ml, prepare cinco diluciones a una concentración final de 2x, diluyendo el stock en medios como se muestra en la Tabla 1, columnas C y D. (Cuando la concentración de antibiótico 2x se diluye con un volumen igual de suspensión celular, dará como resultado la concentración final que se muestra en la Tabla 1, columna B).
¿Cómo funciona la selección de puromicina?
Este compuesto actúa interrumpiendo la síntesis de proteínas tanto en las células procariotas como en las eucariotas. Esto hace que las células mueran, a menos que tengan un gen de resistencia, lo que les permite sobrevivir a la exposición al antibiótico.
¿Cómo se disuelve el polvo de puromicina?
Instrucciones de preparación El producto es soluble en agua (50 mg/ml), dando una solución transparente, incolora a amarillo tenue. La solución madre puede pasarse a través de un filtro de 0,22 µm y almacenarse en alícuotas a –20 °C. También es soluble en metanol (10 mg/ml).
¿Qué es poli Hema?
polyHEMA, en su totalidad metacrilato de poli-2-hidroxietilo, un plástico blando, flexible y absorbente de agua que se utiliza para fabricar lentes de contacto blandas.
¿Se pueden teñir células sin fijar?
Tenga en cuenta que sin la fijación, su muestra podría desintegrarse o podría perder epítopos. Puede realizar la tinción para la fijación/permeabilización/tinción intracelular del marcador extracelular POST. En ese caso, la fijación no afectará al fluorocromo (por ejemplo, APC-Cy7).
¿Qué tan rápido puedes girar las celdas fijas?
Centrifugar durante 5 minutos a 1500–2000 RPM. Las células se vuelven más flotantes después de la fijación. Si el gránulo es demasiado pequeño, gire nuevamente a RPM más altas, pero no exceda las 3000 RPM.
¿Se pueden permeabilizar células vivas?
Además de permeabilizar la membrana de las células muertas fijadas, TX100 también puede permeabilizar las células vivas para liberar moléculas que no pueden penetrar las membranas celulares intactas. La literatura anterior ha informado que la permeabilización reversible de la membrana se puede lograr cuando se usa TX100 con una dosis baja.
¿La digitonina es reversible?
Una baja concentración de digitonina indujo la permeabilización reversible de la membrana plasmática en células somáticas bovinas, de ratón y porcinas. Nuestros resultados sugieren que la permeabilización reversible con digitonina puede usarse para inducir la reprogramación nuclear y activar genes pluripotentes mediante un sistema libre de células.
¿Cómo se arreglan las células?
Para arreglar con solventes orgánicos, use metanol helado, etanol o una mezcla 1:1 de etanol y metanol para cubrir las células en sus cubreobjetos. Una vez cubiertas, incuba tus células en el congelador (-20°C) de 5 a 7 minutos. No se preocupe por mantener sus células estériles en este punto, ¡las está matando!
¿El glutaraldehído permeabiliza?
Para detectar antígenos intracelulares, las células primero deben permeabilizarse, especialmente después de la fijación con agentes de reticulación como formaldehído y glutaraldehído. Debido a que los solventes orgánicos también coagulan proteínas, pueden usarse para fijar y permeabilizar células al mismo tiempo.