El inmunoensayo de polarización de fluorescencia (FPA) es un inmunoensayo homogéneo útil para la detección rápida y precisa de anticuerpos o antígenos. El principio del ensayo es que un tinte fluorescente (unido a un antígeno oa un fragmento de anticuerpo) puede ser excitado por luz polarizada plana en la longitud de onda adecuada.
¿Cuál es el propósito de la polarización de fluorescencia?
La polarización de fluorescencia (FP) es un método homogéneo que permite un análisis rápido y cuantitativo de diversas interacciones moleculares y actividades enzimáticas.
¿Qué es el ensayo de FP?
La tecnología de polarización de fluorescencia (FP) se basa en la medición de la rotación de moléculas y se ha utilizado ampliamente para estudiar las interacciones moleculares en solución. Este método se puede utilizar para medir la unión y la disociación entre dos moléculas si una de las moléculas de unión es relativamente pequeña y fluorescente.
¿La fluorescencia está polarizada?
La polarización de fluorescencia es un promedio ponderado de los dos valores, lo que proporciona una evaluación directa de la fracción de unión molécula/ligando. Por lo tanto, las mediciones de polarización de fluorescencia también son indicativas de la formación de complejos de molécula/ligando más grandes. Figura 4.5. Principio de polarización de fluorescencia.
¿Cómo se mide el inmunoensayo de polarización de fluorescencia?
Los inmunoensayos de polarización de fluorescencia emplean un antígeno unido a un fluoróforo que, cuando se une al anticuerpo de interés, aumentará la polarización de la fluorescencia. El cambio de polarización es proporcional a la cantidad de antígeno en la muestra y se mide con un analizador de polarización de fluorescencia.
¿Por qué es importante el inmunoensayo de polarización de fluorescencia?
El inmunoensayo de polarización de fluorescencia (FPA) es un inmunoensayo homogéneo útil para la detección rápida y precisa de anticuerpos o antígenos. Debido a que es una interacción antígeno-anticuerpo primaria, la velocidad de reacción es muy rápida y, por lo general, se puede obtener un resultado en minutos.
¿Cómo funciona la anisotropía de fluorescencia?
La anisotropía de fluorescencia o polarización de fluorescencia es una medida del cambio de orientación de una molécula en el espacio, con respecto al tiempo entre los eventos de absorción y emisión. Cuanto más lento es el movimiento, más la luz emitida retiene la polarización.
¿Cómo se hace la anisotropía de fluorescencia?
Experimentos de anisotropía de fluorescencia Las mediciones se realizaron a 25 °C en una cubeta de 200 μl con una longitud de paso de 5 mm 10. En una cubeta de fluorescencia, coloque 200 μl de 30 nM SBDS-FlAsH en tampón de anisotropía y titule 2 μl de 30 μM EFL1. Mezcle bien y deje reposar la reacción durante 3 minutos antes de medir el valor de anisotropía.
¿Qué es la droga y la FP?
Los ensayos de polarización de fluorescencia (ensayos FP) se utilizan de diversas maneras. Desde el descubrimiento de moléculas en solución hasta el control de los niveles de fármacos en entornos clínicos, y permiten el descubrimiento de fármacos. Además, los científicos utilizan la FP para estudiar la unión de moléculas pequeñas con proteínas, antígenos y anticuerpos y hormonas y receptores.
¿Qué es un ensayo de FP competitivo?
El inmunoensayo FA/FP competitivo se utiliza para la detección de moléculas pequeñas en muchos campos, como inhibidores de detección, seguimiento de fármacos terapéuticos y detección de pesticidas y toxinas [4], [5]. Este inmunoensayo emplea un inmunoanticuerpo como ligando de afinidad y una diana de molécula pequeña marcada con fluoróforo como trazador.
¿Qué es la espectroscopia de polarización de fluorescencia?
La espectroscopia de polarización de fluorescencia es uno de esos métodos, que estudia la relación entre la polarización de la luz que se utiliza para la excitación y la luz que se detecta posteriormente a partir de la fluorescencia.
¿Qué es la fluorescencia resuelta en el tiempo?
La fluorescencia de una muestra monitoreada en función del tiempo después de la excitación por un pulso de luz. Para la eliminación de ambigüedades, este procedimiento a menudo se denomina medición de vida útil de fluorescencia.
¿Qué es un fluorocromo y cómo se usa?
Los colorantes fluorescentes (o fluorocromos) se utilizan comúnmente como reactivos de detección en diversas aplicaciones, como la obtención de imágenes celulares y la citometría de flujo. Los fluorocromos absorben energía luminosa de una longitud de onda específica y la vuelven a emitir a una longitud de onda más larga. Los fluorocromos difieren en la intensidad a la que emiten luz.
¿Qué es el análisis FRET?
FRET se basa en la transferencia de energía dependiente de la distancia de una molécula donadora a una molécula aceptora. Debido a su sensibilidad a la distancia, FRET se ha utilizado para investigar interacciones moleculares. FRET es la transmisión de energía sin radiación de una molécula donadora a una molécula aceptora.
¿Por qué se produce la fluorescencia?
La fluorescencia ocurre cuando los electrones regresan de un estado de excitación singlete al estado fundamental. Pero en algunas moléculas, los espines de los electrones excitados pueden cambiar a un estado de triplete en un proceso llamado cruce entre sistemas. Estos electrones pierden energía hasta que se encuentran en el estado fundamental de triplete.
¿Qué tipo de luz utiliza la microscopía de fluorescencia?
La mayoría de los microscopios de fluorescencia que se utilizan actualmente en biología son microscopios de epifluorescencia, lo que significa que tanto la excitación como la observación de la fluorescencia se producen por encima de la muestra. La mayoría utiliza una lámpara de descarga de arco de xenón o mercurio como fuente de luz más intensa.
¿Cuáles son los diferentes procesos de extinción de la fluorescencia que se conocen?
La extinción de la fluorescencia se refiere a cualquier proceso que disminuya la intensidad de la fluorescencia de una muestra. Una variedad de interacciones moleculares pueden resultar en la extinción. Estos incluyen reacciones en estado excitado, reordenamientos moleculares, transferencia de energía, formación de complejos en estado fundamental y enfriamiento por colisión.
¿Cuál es el rango de valores de anisotropía?
Los valores de anisotropía pueden exceder 0,4 para la excitación multifotónica (Capítulo 18). donde β es el ángulo entre las transiciones de absorción y emisión. El término r0 se utiliza para referirse a la anisotropía observada en ausencia de otros procesos despolarizantes como la difusión rotacional o la transferencia de energía.
¿Bajo qué condiciones la intensidad de la fluorescencia es proporcional a la concentración?
Espectroscopia de fluorescencia En condiciones en las que la densidad óptica es inferior a 0,07, la intensidad de la fluorescencia es proporcional a la concentración y, por lo tanto, es muy conveniente comparar varios espectros de fluorescencia entre sí.
¿Qué es la anisotropía negativa?
Un valor negativo significa que la intensidad de fluorescencia perpendicular fue mayor que la intensidad paralela. La anisotropía negativa es una posibilidad. Los valores pueden estar entre -0,2 y +0,4.
¿Cómo funciona el inmunoensayo de fluorescencia?
Los inmunoensayos fluorescentes son simplemente un tipo diferente de inmunoensayo. Un inmunoensayo moderno basado en fluorescencia utiliza como reactivo de detección un compuesto fluorescente que absorbe luz o energía (energía de excitación) en una longitud de onda específica y luego emite luz o energía en una longitud de onda diferente.
¿Cómo funciona el inmunoensayo enzimático?
Los inmunoensayos enzimáticos (EIA) se utilizan para visualizar y cuantificar antígenos. Utilizan un anticuerpo conjugado con una enzima para unirse al antígeno, y la enzima convierte un sustrato en un producto final observable. El sustrato puede ser un cromógeno o un fluorógeno.
¿Cómo funciona el inmunoensayo Cedia?
Un inmunoensayo de donante enzimático clonado (CEDIA) es un inmunoensayo enzimático homogéneo competitivo. Este ensayo utiliza fragmentos de dos componentes de una enzima, cada uno de los cuales es individualmente inactivo. La competencia por el anticuerpo ocurre entre el analito en la muestra y el conjugado enzima-fragmento-analito.
¿Cómo funciona la técnica de inmunoensayo de multiplicación de enzimas?
La técnica de inmunoensayo multiplicado por enzimas (EMIT®) es un método simple, rápido y homogéneo que ahora se emplea comúnmente para medir una amplia gama de sustancias (en particular, fármacos). La técnica funciona sobre la base de que el fármaco presente es proporcional a la inhibición de una reacción del sustrato enzimático.