La prueba LAL (lisado de amebocitos de limulus), también conocida como prueba de endotoxinas bacterianas, es un ensayo in vitro utilizado para detectar la presencia y concentración de endotoxinas bacterianas en medicamentos y productos biológicos, y es una parte importante de la microbiología farmacéutica.
¿Cuál es el propósito de la prueba de amebocitos de Limulus?
La prueba de lisado de amebocitos de limulus (LAL) es un método simple para la detección de bacterias Gram-negativas viables y no viables. Ciertos lipopolisacáridos de la pared celular (es decir, endotoxinas) de este grupo bacteriano conducen a la gelificación de los lisados de células sanguíneas (amebocitos) del cangrejo Limulus polyphemus.
¿Qué significa el término Limulus en la prueba LAL?
El lisado de amebocitos de Limulus (LAL) es un extracto acuoso de células sanguíneas (amebocitos) del cangrejo herradura del Atlántico Limulus polyphemus. Esta reacción es la base de la prueba LAL, que es ampliamente utilizada para la detección y cuantificación de endotoxinas bacterianas.
¿Cómo se extrae el lisado de Limulus?
El lisado se produce extrayendo sangre del cangrejo. Esto se hace utilizando un método no letal en el que se extrae sangre de un gran seno sanguíneo dorsal, el pericardio. Los cangrejos se devuelven al agua dentro de las 24 horas y se recuperan por completo. Jack Levin demuestra la extracción de sangre de un Limulus.
¿Por qué se prefiere la prueba LAL?
Las endotoxinas bacterianas son peligrosas para los mamíferos y provocan infecciones que en muchos casos pueden ser mortales. Debido al alto nivel de resistencia de estas toxinas, es necesario realizar la prueba LAL en diferentes ambientes y controlar todos los ambientes donde se puedan propagar.
¿Qué causa la endotoxina?
Fuente y Exposición. La endotoxina se encuentra en bacterias Gram negativas y productos o desechos bacterianos. Por lo tanto, la endotoxina está ampliamente presente en el medio ambiente, incluido el polvo, los desechos animales, los alimentos y otros materiales generados a partir de productos bacterianos Gram-negativos o expuestos a ellos.
¿Cómo se realiza la prueba LAL?
Procedimiento de prueba: una BET consiste en analizar la muestra líquida o el extracto de la muestra utilizando lisado de amebocitos de Limulus (LAL). LAL es un reactivo hecho de la sangre del cangrejo herradura. En presencia de endotoxinas bacterianas, el lisado reacciona formando un coágulo o provocando un cambio de color según la técnica.
¿Los cangrejos herradura transmiten enfermedades?
Una enfermedad aparentemente común en los cangrejos herradura, tanto en libertad como en cautiverio, es la patología del caparazón causada por una infección de algas verdes (cloroficofitas) (Figura 1).
¿Por qué los lipopolisacáridos son tóxicos?
La toxicidad del LPS se debe principalmente a este lípido A, mientras que los polisacáridos son menos tóxicos. En las bacterias Gram-negativas, el LPS está anclado a la membrana externa a través del lípido A. Las bacterias liberan fragmentos de LPS en su entorno, mientras que esta capa se renueva constantemente para mantener su integridad.
¿Están en peligro de extinción los cangrejos herradura?
A pesar de que los cangrejos herradura no se consideran una especie en peligro de extinción, su gran demanda ha reducido seriamente la población, colocándolos en la lista de “especies casi amenazadas”. Como resultado, en Nueva Jersey es ilegal sacar uno de su hábitat por cualquier motivo, pero las leyes que protegen a los cangrejos herradura
¿Cuál no es correcto para la prueba LAL?
Error #1: falsos positivos de polisacáridos fúngicos. La LAL se basa en una reacción de coagulación que ocurre en presencia de endotoxina; sin embargo, los estudios han demostrado que un polisacárido fúngico llamado (1→3)-β-D-glucano también induce la coagulación, lo que puede dar lugar a resultados falsos positivos.
¿Qué es el lisado de amebocitos de Limulus y cómo se usa?
El lisado de amebocitos de limulus (LAL) se ha utilizado ampliamente durante aproximadamente 30 años para la detección de endotoxinas en el control de calidad de medicamentos inyectables y dispositivos médicos. La LAL constituye una cascada de serina proteasas que se desencadenan por niveles mínimos de endotoxina, que culminan en un coágulo de gel al final de la reacción.
¿Qué es una endotoxina bacteriana?
Las endotoxinas bacterianas, que se encuentran en la membrana externa de las bacterias gramnegativas, son miembros de una clase de fosfolípidos llamados lipopolisacáridos (LPS). Los LPS no son productos exógenos de bacterias gram negativas. La liberación de LPS de las bacterias tiene lugar después de la muerte y lisis de la célula.
¿Cuál es la importancia de la prueba de pirógenos?
La prueba de pirógenos se realiza para verificar la presencia o ausencia de pirógenos en todos los parenterales acuosos. Se utilizan conejos para realizar la prueba porque su temperatura corporal aumenta cuando se introduce pirógeno por vía parenteral. Para esta prueba, se seleccionan tres conejos sanos, cada uno de los cuales pesa al menos 1,5 kg.
¿Qué causa LAL?
Los lipopolisacáridos, que son especies químicas consideradas tóxicas al producir la lisis celular de las bacterias Gram negativas, activan una serie de reacciones en cadena que se dan en la hemolinfa del cangrejo herradura, provocando finalmente la turbidez de la muestra. Esta es la señal analítica utilizada para desarrollar la prueba LAL.
¿Por qué la prueba LAL es tan popular entre las industrias farmacéuticas?
Una de las razones que ha hecho que la prueba LAL prevalezca en la industria farmacéutica es que los fabricantes de LAL evitan cuidadosamente dañar a los animales vivos durante la producción y la prueba. En estos casos, el test LAL ha permitido realizar la detección de las endotoxinas sin problemas.
¿El LPS es bueno o malo?
El LPS bacteriano también puede ser dañino para la salud humana. Los estudios han demostrado que los factores estresantes, incluido el estrés psicosocial y una dieta poco saludable, pueden debilitar la barrera intestinal. Esto permite que el LPS del microbioma intestinal se filtre al torrente sanguíneo, lo que lleva a una inflamación crónica de bajo nivel.
¿Cómo deshacerse de las endotoxinas de forma natural?
Maneras naturales de apoyar el sistema de desintoxicación de su cuerpo
Reduzca el azúcar añadido y los alimentos procesados.
Coma alimentos ricos en antioxidantes.
Coma alimentos ricos en fibra.
Disminuya la sal.
Coma alimentos antiinflamatorios.
Beba agua limpia para eliminar las toxinas.
Ejercicio para liberar toxinas.
Duerme bien.
¿Cómo causa la inflamación el LPS?
El LPS activa las células del sistema inmunitario innato, como los macrófagos y los neutrófilos, que sintetizan factores proinflamatorios, como la IL-1β y el TNF, las MMP y los radicales libres que provocan una inflamación secundaria dramática en los tejidos.
¿Es ilegal vender sangre de cangrejo herradura?
“Esta cosecha de cangrejos herradura es ilegal y no se debe permitir que continúe un año más”, dijo en un comunicado Catherine Wannamaker, abogada principal del Centro de Derecho Ambiental del Sur. El cangrejo herradura del Atlántico es una especie protegida y un contribuyente desde hace mucho tiempo a la investigación biomédica.
¿Los cangrejos herradura sirven para algo?
Las herraduras adultas sirven como presa para tortugas marinas, caimanes, caracoles y tiburones. Los cangrejos de herradura también son extremadamente importantes para la industria biomédica porque su sangre azul única a base de cobre contiene una sustancia llamada “Limulus Amebocyte Lysate” o “LAL”.
¿Pueden hacerte daño los cangrejos herradura?
1) Los cangrejos herradura no pican ni muerden. Su cola no te hace daño. En realidad, es una forma en que se ayudan a sí mismos, pero en muchos casos quedan varados en lo alto de la playa durante la temporada de desove. Su cola puede parecer aterradora, pero se usa para ayudarlos si una ola los voltea.
¿Cómo se detecta la endotoxina?
Por lo tanto, es fundamental desarrollar métodos sensibles, precisos y rápidos para su detección. La prueba de pirógenos en conejo es la primera técnica estándar para la detección de endotoxinas y, en la actualidad, ha sido reemplazada por la prueba de lisado de amebocitos de Limulus, que es la técnica de detección de endotoxinas más popular.
¿Cómo se realiza la prueba de endotoxinas bacterianas explicar?
Una prueba de endotoxinas bacterianas (BET), como LAL (lisado de amebocitos de limulus), es un ensayo in vitro que se utiliza para detectar endotoxinas bacterianas. La prueba de endotoxinas bacterianas utiliza el lisado de las células sanguíneas de los cangrejos herradura para detectar endotoxinas bacterianas.
¿Qué es la prueba de pirógenos en conejo?
La prueba de pirógenos se publicó por primera vez en 1986. La prueba consiste en medir los cambios en la temperatura corporal de los conejos después de la inyección intravenosa de una solución estéril de la solución que necesita ser examinada. Como resultado, se requiere una prueba que cubra todos los tipos de pirógenos para confirmar la ausencia de pirógenos que no sean endotoxinas.